Sự di chuyển của protein trong hệ thống Laemmli gel A: Gel xếp chồng lên nhau, B: Giải quyết gel, o: ứng dụng mẫu c: sự gián đoạn trong đệm và ma trận điện di Hầu hết sự phân tách protein được thực hiện bằng cách sử dụng một hệ thống đệm “không liên tục” [hay DISC] tăng đáng kể độ sắc nét của các băng trong gel. Trong quá trình điện di trong một hệ gel không liên tục, một gradient ion được hình thành trong giai đoạn đầu của quá trình điện di, làm cho tất cả các protein tập trung vào một dải sắc. Sự hình thành gradient ion được thực hiện bằng cách chọn một giá trị pH ở đó các ion của đệm chỉ được nạp vừa phải so với các protein bao bọc bởi SDS. Những điều kiện này cung cấp một môi trường trong đó các phản ứng của Kohlrausch xác định độ dẫn phân. Kết quả là, protein tráng SDS được tập trung nhiều lần trong một vùng mỏng theo thứ tự là 19 μm trong vòng vài phút. Ở giai đoạn này, tất cả các protein đều di chuyển với tốc độ di chuyển tương tự bằng phương pháp isotachophoresis. Điều này xảy ra trong một vùng của gel có lỗ chân lông lớn hơn để ma trận gel không làm chậm sự di chuyển trong quá trình tập trung hoặc “xếp chồng”. Tách các protein theo kích cỡ đạt được ở vùng “giải quyết” thấp hơn của gel. Gel xử lý thông thường có kích thước lỗ nhỏ hơn nhiều, dẫn đến hiệu ứng sàng lọc mà bây giờ xác định sự di động điện di của protein. Đồng thời, phần tách của gel cũng có giá trị pH, trong đó các ion đệm có tải lớn hơn, làm cho chúng “vượt qua” các protein được bảo vệ bởi SDS và loại bỏ gradient ion và do đó ảnh hưởng xếp chồng lên nhau.
Một hệ thống đệm rộng rãi liên tục là hệ thống tris-glycine hoặc “Laemmli” chứa ở mức pH 6,8 và giải quyết ở pH ~ 8,3-9,0. Hạn chế của hệ thống này là các giá trị pH này có thể thúc đẩy sự hình thành liên kết disulfid giữa cysteine dư trong protein bởi vì pKa của cysteine dao động từ 8-9 và vì chất làm giảm có trong đệm tải không di chuyển chung với các protein. Những tiến bộ gần đây trong công nghệ đệm làm giảm bớt vấn đề này bằng cách giải quyết các protein ở pH thấp hơn pKa của cysteine [ví dụ, bis-tris, pH 6,5] và bao gồm các tác nhân khử [ví dụ bisulfit natri] di chuyển vào gel trước các protein để duy trì một môi trường giảm thiểu. Lợi ích bổ sung của việc sử dụng bộ đệm có giá trị pH thấp hơn là gel acrylamide ổn định hơn ở các giá trị pH thấp hơn, do đó, gel có thể được lưu trữ trong thời gian dài trước khi sử dụng
Điện di gel SDS của gel Khi điện áp được áp dụng, anion [và các phân tử mẫu tích điện âm] di chuyển về phía điện cực dương [anode] trong buồng dưới, ion dẫn đầu là Cl- [tính di động cao và nồng độ cao]; glycinate là ion cuối [tính di động thấp và nồng độ thấp]. Các hạt protein SDS không di chuyển tự do tại ranh giới giữa Cl- của chất đệm gel và Gly- của bộ đệm catốt. Friedrich Kohlrausch phát hiện ra rằng luật của Ohm cũng áp dụng cho các chất điện phân giải phóng. Do sự giảm điện áp giữa Cl- và Glycine-đệm, các protein được nén [chồng lên nhau] thành các lớp mỏng micromet. Ranh giới di chuyển qua một gradient độ rỗng và ngăn xếp protein dần dần phân tán do tăng ma sát ma sát của ma trận gel. Việc xếp chồng và tháo dỡ xảy ra liên tục trong gel gradient, cho mỗi protein ở một vị trí khác nhau. Đối với một protein hoàn chỉnh tách bỏ nồng độ polyacrylamide-gel phải vượt quá 16% T. Hệ thống gel ‘Laemmli’ là một gel gel đơn giản. Sự không liên tục về pH của bộ đệm không có ý nghĩa đối với chất lượng tách và không cần phải có một “gel xếp chồng” với độ pH khác.
Hình dung Các vết đốm protein phổ biến nhất là Coomassie Brilliant Blue. Nó là thuốc nhuộm anion, không liên kết với protein đặc biệt. Protein trong gel được cố định bằng axit axetic và đồng thời nhuộm màu. Thuốc nhuộm dư thừa kết hợp vào gel có thể được loại bỏ bằng cách lấy đi cùng với dung dịch mà không cần thuốc nhuộm. Các protein được phát hiện dưới dạng các dải màu xanh trên nền rõ ràng.
Khi cần nhiều phương pháp nhạy cảm hơn so với nhuộm bằng Coomassie thì nhuộm bạc thường được sử dụng. Bạc nhuộm là một quy trình nhạy cảm để phát hiện ra số lượng vết của protein trong gel, nhưng cũng có thể hình dung axit nucleic hoặc polysaccharides.
Tương tự như trong điện di gel axit nucleic, thuốc nhuộm theo dõi thường được sử dụng. Thuốc nhuộm anion của sự di động điện di thường được biết trong bộ đệm mẫu. Thuốc nhuộm theo dõi rất phổ biến là Bromophenol blue. Thuốc nhuộm này có màu ở pH kiềm và trung tính và là một phân tử tích điện âm nhỏ di chuyển về phía cực dương. Là một phân tử di động cao di chuyển trước hầu hết các protein
Mọi khoản thanh toán bạn thực hiện trên Alibaba.com đều được bảo mật bằng mã hóa SSL nghiêm ngặt và giao thức bảo vệ dữ liệu PCI DSS
Chính sách hoàn tiền
Yêu cầu hoàn tiền nếu đơn hàng của bạn không được vận chuyển, bị thiếu hoặc giao đến có vấn đề về sản phẩm